ABSTRACT
Antisera were developed in rabbits after challenge with intracellular antigens of Candida albicans, C. tropicalis and C. parapsilosis. Microorganism catalase has been correlated with virulence, resistance to drugs and immunogenicity. The intracellular catalase is consistently present in strains of Candida and in this paper, the enzyme activity was analysed by PAGE after exposition to antisera. The catalases of C. albicans, C. parapsilosis and C. tropicalis were immunogenic and differed in their binding to specific antibodies raised in rabbits. Tests of cross-reactivity between different Candida species showed that when antiserum from C. albicans immunized rabbit was incubated with intracellular extracts of these three Candida species, the catalases activities were abolished. However, the antisera from C. parapsilosis or C. tropicalis immunized rabbits did not affect the catalase activity of C. albicans; the enzyme of C. albicans was inactivated only by the antiserum to the catalase of own C. albicans. The antiserum to the catalase of C. tropicalis was species-specific and did not cross-react with catalases of C. albicans and C. parapsilosis. The activities of Aspergillus niger and bovine catalases were not affected by the antiserum from any Candida immunized rabbits. This report is a preliminary study of specific antisera that react against intracellular catalase of Candida sp. and neutralize the enzymatic activity. Further study is necessary to develop species-specific antibody once differences in the susceptibility of the Candida species to commonly used antifungal drugs make identification to the species level important.
Antisoros foram desenvolvidos em animais em resposta à injeção de antígenos intracelulares de Candida albicans, C. tropicalis e C. parapsilosis. A presença de catalase nos microrganismos tem sido relacionada à virulência, resistência a drogas e imunogenicidade. A catalase intracelular está sempre presente nas cepas de leveduras do gênero Candida e neste trabalho, sua atividade enzimática foi analisada por PAGE, após exposição aos antisoros obtidos. Verificou-se que as catalases de C. albicans, C. tropicalis e C. parapsilosis foram imunogênicas e apresentaram diferenças quanto à sua ligação aos anticorpos específicos produzidos nos coelhos. Testes de reação cruzada mostraram que quando o antisoro obtido do animal imunizado com C. albicans foi incubado com os extratos intracelulares de cada uma das três espécies, a atividade da catalase intracelular foi neutralizada em todos os casos. Entretanto, os antisoros obtidos da imunização com C. parapsilosis e C. tropicalis não afetaram a atividade da catalase de C. albicans; a catalase de C. albicans foi neutralizada somente pelo antisoro específico. O antisoro anti-C. tropicalis foi espécie-específico e não reagiu com as catalases de C. albicans e C. parapsilosis. As atividades das catalases bovina e de Aspergillus niger não foram afetadas por nenhum dos antisoros produzidos contra Candida sp. Este trabalho é uma análise preliminar de antisoros específicos reagentes com a catalase intracelular de Candida sp., capazes de neutralizar a atividade enzimática. Novos estudos são importantes para o desenvolvimento de anticorpo espécie-específico, uma vez que diferentes espécies de Candida apresentam diferente susceptibilidade aos antifúngicos de uso corrente.
Subject(s)
Animals , Candidiasis , Candida/isolation & purification , Catalase/analysis , Catalase/isolation & purification , In Vitro Techniques , Diagnostic Techniques and Procedures , Methods , Serology , VirulenceABSTRACT
Própolis brasileira, proveniente do estado de São Paulo, foi submetida à extração usando vários solventes, resultando em extratos com diferentes composições. Estes extratos foram submetidos à Cromatografia em Camada Delgada (CCD). Análise bioautográfica das placas de CCD permitiu identificar as frações com atividade antimicrobiana, que foram então analisadas por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Ensaios in vitro freqüentemente utilizados para avaliar a atividade de própolis frente a bactérias Gram-positivas foram comparados para determinar qual renderia os resultados mais consistentes. A atividade bactericida destes extratos foi analisada por Diluição Seriada em Tubos e por testes de Difusão em Agar. O método de Diluição em Tubos permitiu obter os resultados mais consistentes e a Concentração Bactericida Mínima dos extratos variou entre 2,5 e 20,0 mg/mL, para as espécies de bactérias Gram-positivas testadas. Os resultados do método de Difusão em Agar foram diretamente proporcionais à hidrossolubilidade dos extratos, e não avaliaram a atividade bactericida corretamente. A atividade bactericida desta amostra resultou da combinação de vários componentes, identificados por CLAE, que foram extraídos preferencialmente usando etanol 50 per center como solvente.
Subject(s)
Chromatography, High Pressure Liquid , Chromatography, Thin Layer , In Vitro Techniques , Propolis/analysis , MethodsABSTRACT
"Streptococcus salivarius" strains, isolated from children with and without sore throat, were tested for bacteriocin production against "Streptococcus pyogenes. "S. salivarius" strains producing bacteriocin-like inhibitory substances (BLIS) against "S. pyogenes" were more frequently found in children without sore throat by the presence of BLIS-positive "S. salivarius" strains